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诊断HIV抗体检测筛查的方法

2016-12-06 艾友网

一、HIV抗体筛查试验

HIV抗体的筛查检测包括HIV抗体检测的酶联免疫吸附试验( ELISA)、化学发光或免疫荧光试验和各种快速检测试验( RT)等。

(一)酶联免疫吸附试验( ELISA )

酶联免疫吸附试验是HIV抗体检测经典的、最常用的方法,这个方法的特点是易于掌握、判断结果有客观标准、价格低廉、适合于大批样本的检测。ELISA可使用血液、唾液、尿液样品,多为单纯HIV抗体检测试剂,另有第四代HIV抗原抗体联合检测试剂可同时检测血液中HIV-1 p24抗原和HIV抗体,缩短窗口期。

现今用于HIV抗体检测的ELISA试剂大多是双抗原夹心法,在固相载体上(微孑L板内表面)包被HJV抗原,样品中的HIV抗体与固相载体上的HIV抗原结合,形成抗原抗体复合物,加人酶标记的同一类HIV抗原分子,形成抗原-抗体-抗原的复合物。此复合物同底物发生酶催化显色反应,用酶标仪测定光密度值(OD值),与临界值(Cut-off值)进行比较判定结果。有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。

(二)化学发光或免疫荧光试验

这类试剂采用发光或荧光底物,既可检测抗体,也可联合检测抗原抗体。HIV抗原或抗体包被于固相载体,加入待检样品和酶或荧光标记的HIV抗原或抗体,加发光或荧光底物,用发光或荧光仪测定结果。有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。

(三)HIV抗体快速检测(RT)

这类试验简单快速,适用于应急检测、VCT门诊检测、医院门诊急诊检测、艾滋病检测点检测等。一般可在15-30 min内得出结果,大多仅利用自身试剂盒,不需要任何辅助试剂和仪器设备。

HIV抗体快速检测包括凝集试验、免疫渗滤试验和免疫层析试验。根据检测样本可分为血液快速检测和唾液快速检测。

1.明胶颗粒凝集试验( PA):是HIV血清抗体检测的一种简便方法。将HIV抗原致敏的明胶颗粒作为载体,与待检样品作用。当待检样品含有HIV抗体时,明胶颗粒与抗体发生凝集反应,根据凝集情况判读结果。趴试剂有两种:同时检测HIV-1和HIV-2抗体以及分别检测HIV-1和HIV-2抗体。有效试验必须有阴性和阳性质控。

2.免疫渗滤试验(斑点ELISA和斑点免疫胶体金或胶体硒快速试验):均以硝酸纤维膜为载体,HIV抗原点状固定在膜上,加待检样品。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。有效试验的质控点必须显色。

3.免疫层析试验:以硝酸纤维膜为载体,HIV抗原线状固定在膜上,待检样品沿着固相载体迁移,阳性结果在膜上抗原部位显示出有色条带。有效试验的质控带必须显色。

4.唾液HIV抗体快速检测:原理为间接酶免疫法,在硝酸纤维膜上包被人工合成的HIV gp41/gp36抗原,可同时检测唾液中的HIV-1/2抗体,使用收集口腔黏膜渗出液(OMT)的采集器可保护HIV体不受破坏。

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